Hvala vam što ste posjetili Nature.com. Verzija preglednika koju koristite ima ograničenu podršku za CSS. Za najbolje rezultate preporučujemo korištenje novijeg preglednika (ili onemogućavanje načina kompatibilnosti u Internet Exploreru). U međuvremenu, kako bismo osigurali kontinuiranu podršku, prikazat ćemo stranicu bez stilova i JavaScripta.
Uspostavljanje životinjskih modela modičnih promjena (MC) važna je osnova za proučavanje MC. Pedeset četiri novozelandska bijela zeca podijeljena su u grupu s lažnom operacijom, grupu s implantacijom mišića (ME grupa) i grupu s implantacijom nucleus pulposusa (NPE grupa). U NPE grupi, intervertebralni disk je eksponiran anterolateralnim lumbalnim hirurškim pristupom, a igla je korištena za punkciju tijela pršljena L5 blizu završne ploče. NP je izvučen iz intervertebralnog diska L1/2 špricem i ubrizgan u njega. Bušenje rupe u subhondralnoj kosti. Hirurški postupci i metode bušenja u grupi s implantacijom mišića i grupi s lažnom operacijom bili su isti kao i u grupi s implantacijom NP. U ME grupi, komad mišića je postavljen u rupu, dok u grupi s lažnom operacijom ništa nije postavljeno u rupu. Nakon operacije, izvršeno je MRI skeniranje i molekularno biološko testiranje. Signal u NPE grupi se promijenio, ali nije bilo očigledne promjene signala u grupi s lažnom operacijom i ME grupi. Histološka analiza je pokazala da je na mjestu implantacije uočena abnormalna proliferacija tkiva, a ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ je bila povećana u NPE grupi. Implantacija NP u subhondralnu kost može formirati životinjski model MC.
Modic promjene (MC) su lezije završnih ploča pršljenova i susjedne koštane srži vidljive na magnetnoj rezonanciji (MRI). Prilično su česte kod osoba sa pridruženim simptomima1. Mnoge studije su naglasile važnost MC zbog njene povezanosti sa bolom u donjem dijelu leđa (LBP)2,3. de Roos i sar.4 i Modic i sar.5 nezavisno su prvi opisali tri različita tipa subhondralnih signalnih abnormalnosti u koštanoj srži pršljenova. Modic promjene tipa I su hipointenzivne na T1-ponderisanim (T1W) sekvencama i hiperintenzivne na T2-ponderisanim (T2W) sekvencama. Ova lezija otkriva fisurne završne ploče i susjedno vaskularno granulacijsko tkivo u koštanoj srži. Modic promjene tipa II pokazuju visok signal i na T1W i na T2W sekvencama. Kod ove vrste lezije može se naći destrukcija završne ploče, kao i histološka masna zamjena susjedne koštane srži. Modic promjene tipa III pokazuju nizak signal u T1W i T2W sekvencama. Uočene su sklerotične lezije koje odgovaraju završnim pločama6. MC se smatra patološkom bolešću kičme i usko je povezana s mnogim degenerativnim bolestima kičme7,8,9.
Uzimajući u obzir dostupne podatke, nekoliko studija je pružilo detaljan uvid u etiologiju i patološke mehanizme MC. Albert i saradnici sugerišu da MC može biti uzrokovan hernijacijom diska8. Hu i saradnici pripisuju MC teškoj degeneraciji diska10. Kroc je predložio koncept "unutrašnje rupture diska", koji navodi da ponavljajuće traume diska mogu dovesti do mikropukotina u završnoj ploči. Nakon formiranja pukotine, uništavanje završne ploče od strane nucleus pulposusa (NP) može izazvati autoimuni odgovor, što dalje dovodi do razvoja MC11. Ma i saradnici su dijelili slično mišljenje i izvijestili da autoimunost izazvana NP igra ključnu ulogu u patogenezi MC12.
Ćelije imunološkog sistema, posebno CD4+ T pomoćnički limfociti, igraju ključnu ulogu u patogenezi autoimunosti13. Nedavno otkrivena Th17 podskupina proizvodi proinflamatorni citokin IL-17, promovira ekspresiju hemokina i stimulira T ćelije u oštećenim organima da proizvode IFN-γ14. Th2 ćelije također igraju jedinstvenu ulogu u patogenezi imunoloških odgovora. Ekspresija IL-4 kao reprezentativne Th2 ćelije može dovesti do teških imunopatoloških posljedica15.
Iako su provedene brojne kliničke studije o MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, još uvijek nedostaju odgovarajući eksperimentalni modeli na životinjama koji mogu oponašati proces MC koji se često javlja kod ljudi i koji se mogu koristiti za istraživanje etiologije ili novih tretmana kao što je ciljana terapija. Do danas je prijavljeno samo nekoliko životinjskih modela MC koji proučavaju osnovne patološke mehanizme.
Na osnovu autoimune teorije koju su predložili Albert i Ma, ova studija je uspostavila jednostavan i reproducibilan model karcinoma mikobakterija (MC) kod zečeva autotransplantacijom NP u blizini izbušene završne ploče pršljena. Drugi ciljevi su posmatranje histoloških karakteristika životinjskih modela i procjena specifičnih mehanizama NP u razvoju MC. U tu svrhu koristimo tehnike kao što su molekularna biologija, MRI i histološke studije za proučavanje progresije MC.
Dva zeca su uginula od krvarenja tokom operacije, a četiri zeca su uginula tokom anestezije tokom snimanja magnetnom rezonancom. Preostalih 48 zečeva je preživjelo i nije pokazivalo znakove ponašanja ili neurološke znakove nakon operacije.
Magnetna rezonanca (MRI) pokazuje da je intenzitet signala ugrađenog tkiva u različitim rupama različit. Intenzitet signala tijela pršljena L5 u NPE grupi postepeno se mijenjao 12, 16 i 20 sedmica nakon umetanja (T1W sekvenca je pokazala nizak signal, a T2W sekvenca je pokazala mješoviti signal plus nizak signal) (Slika 1C), dok su MRI izgledi druge dvije grupe ugrađenih dijelova ostali relativno stabilni tokom istog perioda (Slika 1A, B).
(A) Reprezentativni sekvencijalni MRI snimci lumbalne kičme zečeva u 3 vremenske tačke. Nisu pronađene abnormalnosti signala na snimcima grupe sa lažnom operacijom. (B) Karakteristike signala tijela pršljena u ME grupi su slične onima u grupi sa lažnom operacijom, i nije uočena značajna promjena signala na mjestu ugradnje tokom vremena. (C) U NPE grupi, nizak signal je jasno vidljiv u T1W sekvenci, a miješani signal i nizak signal su jasno vidljivi u T2W sekvenci. Od perioda od 12 sedmica do perioda od 20 sedmica, sporadični visoki signali koji okružuju niske signale u T2W sekvenci se smanjuju.
Očigledna hiperplazija kosti može se vidjeti na mjestu implantacije tijela pršljena u NPE grupi, a hiperplazija kosti se javlja brže od 12 do 20 sedmica (Sl. 2C) u poređenju sa NPE grupom, nije uočena značajna promjena u modeliranim tijelima pršljena; Sham grupa i ME grupa (Sl. 2C) 2A,B).
(A) Površina tijela pršljena na implantiranom dijelu je vrlo glatka, rupa dobro zacjeljuje i nema hiperplazije u tijelu pršljena. (B) Oblik mjesta implantacije u ME grupi je sličan onome u grupi sa lažnom operacijom i nema očigledne promjene u izgledu mjesta implantacije tokom vremena. (C) Koštana hiperplazija se javila na mjestu implantacije u NPE grupi. Koštana hiperplazija se brzo povećala i čak proširila kroz intervertebralni disk do kontralateralnog tijela pršljena.
Histološka analiza pruža detaljnije informacije o formiranju kosti. Slika 3 prikazuje fotografije postoperativnih presjeka obojenih H&E-om. U grupi sa lažnom operacijom, hondrociti su bili dobro raspoređeni i nije detektovana proliferacija ćelija (Slika 3A). Situacija u ME grupi bila je slična onoj u grupi sa lažnom operacijom (Slika 3B). Međutim, u NPE grupi, na mjestu implantacije uočen je veliki broj hondrocita i proliferacija NP-sličnih ćelija (Slika 3C);
(A) Trabekule se mogu vidjeti blizu završne ploče, hondrociti su uredno raspoređeni s ujednačenom veličinom i oblikom ćelija i bez proliferacije (40 puta). (B) Stanje mjesta implantacije u ME grupi je slično onome u kontrolnoj grupi. Trabekule i hondrociti se mogu vidjeti, ali nema očigledne proliferacije na mjestu implantacije (40 puta). (B) Može se vidjeti da hondrociti i NP-slične ćelije značajno proliferiraju, a oblik i veličina hondrocita su neujednačeni (40 puta).
Ekspresija mRNA interleukina 4 (IL-4), mRNA interleukina 17 (IL-17) i mRNA interferona γ (IFN-γ) uočena je i u NPE i u ME grupi. Kada su upoređeni nivoi ekspresije ciljnih gena, ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ bila je značajno povećana u NPE grupi u poređenju sa ekspresijom u ME grupi i grupi sa lažnom operacijom (Slika 4) (P < 0,05). U poređenju sa grupom sa lažnom operacijom, nivoi ekspresije IL-4, IL-17 i IFN-γ u ME grupi su se samo neznatno povećali i nisu dostigli statističku promjenu (P > 0,05).
Ekspresija mRNA IL-4, IL-17 i IFN-γ u NPE grupi pokazala je značajno veći trend u odnosu na one u grupi sa lažnom operacijom i ME grupi (P < 0,05).
Nasuprot tome, nivoi ekspresije u ME grupi nisu pokazali značajnu razliku (P>0,05).
Western blot analiza je provedena korištenjem komercijalno dostupnih antitijela protiv IL-4 i IL-17 kako bi se potvrdio izmijenjeni obrazac ekspresije mRNA. Kao što je prikazano na slikama 5A i B, u poređenju sa ME grupom i grupom sa lažnom operacijom, nivoi proteina IL-4 i IL-17 u NPE grupi su bili značajno povećani (P < 0,05). U poređenju sa grupom sa lažnom operacijom, nivoi proteina IL-4 i IL-17 u ME grupi takođe nisu dostigli statistički značajne promjene (P > 0,05).
(A) Nivoi proteina IL-4 i IL-17 u NPE grupi bili su značajno viši nego u ME grupi i placebo grupi (P < 0,05). (B) Western blot histogram.
Zbog ograničenog broja ljudskih uzoraka dobijenih tokom operacije, jasne i detaljne studije o patogenezi karcinoma mikobakterija (MC) su donekle teške. Pokušali smo uspostaviti životinjski model MC kako bismo proučili njegove potencijalne patološke mehanizme. Istovremeno, korištene su radiološka, histološka i molekularno biološka evaluacija za praćenje toka MC izazvanog autograftom neurotransmitera (NP). Kao rezultat toga, model implantacije NP rezultirao je postepenom promjenom intenziteta signala od 12. do 20. sedmice (mješoviti nizak signal u T1W sekvencama i nizak signal u T2W sekvencama), što ukazuje na promjene u tkivu, a histološke i molekularno biološke evaluacije potvrdile su rezultate radiološke studije.
Rezultati ovog eksperimenta pokazuju da su se na mjestu povrede tijela pršljenova u NPE grupi pojavile vizualne i histološke promjene. Istovremeno, uočena je ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ, kao i IL-4, IL-17 i IFN-γ, što ukazuje na to da povreda autolognog tkiva nucleus pulposus u tijelu pršljenova može uzrokovati niz signalnih i morfoloških promjena. Lako je uočiti da su signalne karakteristike tijela pršljenova životinjskog modela (nizak signal u T1W sekvenci, miješani signal i nizak signal u T2W sekvenci) vrlo slične onima kod ljudskih ćelija pršljenova, a MRI karakteristike također potvrđuju zapažanja histologije i bruto anatomije, odnosno da su promjene u ćelijama tijela pršljenova progresivne. Iako se upalni odgovor uzrokovan akutnom traumom može pojaviti ubrzo nakon punkcije, MRI rezultati su pokazali da su se progresivno rastuće promjene signala pojavile 12 sedmica nakon punkcije i trajale do 20 sedmica bez ikakvih znakova oporavka ili poništavanja MRI promjena. Ovi rezultati ukazuju na to da je autologna vertebralna NP pouzdana metoda za uspostavljanje progresivne mikrovaskularne tromboze kod kunića.
Ovaj model punkcije zahtijeva adekvatnu vještinu, vrijeme i hirurški napor. U preliminarnim eksperimentima, disekcija ili prekomjerna stimulacija paravertebralnih ligamentarnih struktura može rezultirati stvaranjem vertebralnih osteofita. Treba paziti da se ne oštete ili iritiraju susjedni diskovi. Budući da se dubina penetracije mora kontrolirati kako bi se dobili konzistentni i ponovljivi rezultati, ručno smo napravili čep odsijecanjem ovojnice igle dužine 3 mm. Korištenje ovog čepa osigurava ujednačenu dubinu bušenja u tijelu pršljena. U preliminarnim eksperimentima, tri ortopedska hirurga uključena u operaciju otkrila su da je s iglama kalibra 16 lakše raditi nego s iglama kalibra 18 ili drugim metodama. Da bi se izbjeglo prekomjerno krvarenje tokom bušenja, držanje igle mirno neko vrijeme osigurat će pogodniji otvor za umetanje, što sugerira da se određeni stepen MC-a može kontrolirati na ovaj način.
Iako su se mnoge studije fokusirale na MC, malo se zna o etiologiji i patogenezi MC25,26,27. Na osnovu naših prethodnih studija, otkrili smo da autoimunost igra ključnu ulogu u pojavi i razvoju MC12. Ova studija ispitala je kvantitativnu ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, koji su glavni putevi diferencijacije CD4+ ćelija nakon stimulacije antigenom. U našoj studiji, u poređenju sa negativnom grupom, NPE grupa je imala veću ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, a nivoi proteina IL-4 i IL-17 su također bili viši.
Klinički, ekspresija IL-17 mRNA je povećana u NP ćelijama pacijenata sa hernijom diska28. Povećani nivoi ekspresije IL-4 i IFN-γ su također pronađeni u modelu akutne nekompresivne hernije diska u poređenju sa zdravim kontrolama29. IL-17 igra ključnu ulogu u upali, oštećenju tkiva kod autoimunih bolesti30 i pojačava imunološki odgovor na IFN-γ31. Pojačano oštećenje tkiva posredovano IL-17 je zabilježeno kod MRL/lpr miševa32 i miševa osjetljivih na autoimunost33. IL-4 može inhibirati ekspresiju proinflamatornih citokina (kao što su IL-1β i TNFα) i aktivaciju makrofaga34. Prijavljeno je da je ekspresija mRNA IL-4 bila drugačija u NPE grupi u poređenju sa IL-17 i IFN-γ u istom vremenskom trenutku; ekspresija mRNA IFN-γ u NPE grupi bila je značajno veća nego u drugim grupama. Stoga, proizvodnja IFN-γ može biti medijator upalnog odgovora izazvanog interkalacijom NP. Studije su pokazale da IFN-γ proizvode višestruki tipovi ćelija, uključujući aktivirane pomoćničke T ćelije tipa 1, prirodne ćelije ubice i makrofage35,36, te da je ključni proinflamatorni citokin koji potiče imunološki odgovor37.
Ova studija sugerira da autoimuni odgovor može biti uključen u pojavu i razvoj MC. Luoma i saradnici su otkrili da su signalne karakteristike MC i prominentnog NP slične na MRI snimku, i oba pokazuju visok signal u T2W sekvenci38. Potvrđeno je da su neki citokini usko povezani s pojavom MC, poput IL-139. Ma i saradnici sugeriraju da izbočenje NP prema gore ili dolje može imati veliki utjecaj na pojavu i razvoj MC12. Bobechko40 i Herzbein i saradnici41 izvijestili su da je NP imunotolerantno tkivo koje ne može ući u vaskularnu cirkulaciju od rođenja. Izbočine NP uvode strana tijela u krvotok, čime posreduju lokalne autoimune reakcije42. Autoimune reakcije mogu izazvati veliki broj imunoloških faktora, a kada su ovi faktori kontinuirano izloženi tkivima, mogu uzrokovati promjene u signalizaciji43. U ovoj studiji, prekomjerna ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ su tipični imunološki faktori, što dodatno dokazuje blisku vezu između NP i MC44. Ovaj životinjski model dobro oponaša proboj NP i ulazak u završnu ploču. Ovaj proces je dodatno otkrio utjecaj autoimunosti na MC.
Kao što se i očekivalo, ovaj životinjski model nam pruža moguću platformu za proučavanje mikrohrskavičnog tkiva (MC). Međutim, ovaj model i dalje ima neka ograničenja: prvo, tokom faze posmatranja životinja, neke zečeve u međufazi razvoja potrebno je eutanazirati radi histološkog i molekularno-biološkog testiranja, tako da neke životinje s vremenom „izlaze iz upotrebe“. Drugo, iako su u ovoj studiji postavljene tri vremenske tačke, nažalost, modelirali smo samo jedan tip MC (promjena Modic tipa I), tako da to nije dovoljno da se predstavi proces razvoja bolesti kod ljudi, a potrebno je postaviti više vremenskih tačaka kako bi se bolje uočile sve promjene signala. Treće, promjene u strukturi tkiva se zaista mogu jasno prikazati histološkim bojenjem, ali neke specijalizovane tehnike mogu bolje otkriti mikrostrukturne promjene u ovom modelu. Na primjer, mikroskopija polarizovane svjetlosti korištena je za analizu formiranja fibrohrskavice u intervertebralnim diskovima zečeva45. Dugoročni efekti NP na MC i završnu ploču zahtijevaju dalja istraživanja.
Pedeset četiri mužjaka novozelandskih bijelih kunića (težine oko 2,5-3 kg, starosti 3-3,5 mjeseci) nasumično su podijeljeni u grupu sa lažnom operacijom, grupu sa implantacijom mišića (ME grupa) i grupu sa implantacijom korijena živca (NPE grupa). Sve eksperimentalne procedure odobrio je Etički komitet bolnice Tianjin, a eksperimentalne metode su provedene u strogom skladu sa odobrenim smjernicama.
Neka poboljšanja su napravljena u hirurškoj tehnici S. Sobajime 46. Svaki zec je postavljen u lateralni ležeći položaj, a prednja površina pet uzastopnih lumbalnih intervertebralnih diskova (IVD) je eksponirana korištenjem posterolateralnog retroperitonealnog pristupa. Svaki zec je primio opću anesteziju (20% uretan, 5 ml/kg putem ušne vene). Uzdužni rez kože je napravljen od donjeg ruba rebara do ruba zdjelice, 2 cm ventralno od paravertebralnih mišića. Desna anterolateralna kičma od L1 do L6 je eksponirana oštrom i tupom disekcijom potkožnog tkiva, retroperitonealnog tkiva i mišića (Slika 6A). Nivo diska je određen korištenjem ruba zdjelice kao anatomske orijentacijske tačke za nivo diska L5-L6. Koristite iglu za punkciju kalibra 16 da izbušite rupu blizu završne ploče pršljena L5 do dubine od 3 mm (Slika 6B). Koristite špricu od 5 ml za aspiraciju autolognog nucleus pulposusa u intervertebralnom disku L1-L2 (slika 6C). Uklonite nucleus pulposus ili mišić prema zahtjevima svake grupe. Nakon što se bušotina produbi, resorptivni konci se postavljaju na duboku fasciju, površinsku fasciju i kožu, pazeći da se ne ošteti periostalno tkivo tijela pršljena tokom operacije.
(A) Disk L5-L6 se eksponira posterolateralnim retroperitonealnim pristupom. (B) Koristite iglu kalibra 16 za bušenje rupe blizu završne ploče L5. (C) Uzimaju se autologni MF-ovi.
Opšta anestezija je primijenjena 20% uretanom (5 ml/kg) putem ušne vene, a rendgenski snimci lumbalne kičme su ponovljeni nakon 12, 16 i 20 sedmica postoperativno.
Zečevi su žrtvovani intramuskularnom injekcijom ketamina (25,0 mg/kg) i intravenoznim natrijum pentobarbitalom (1,2 g/kg) 12, 16 i 20 sedmica nakon operacije. Cijela kičma je uklonjena za histološku analizu i izvršena je stvarna analiza. Kvantitativna reverzna transkripcija (RT-qPCR) i Western blot su korišteni za detekciju promjena u imunološkim faktorima.
MRI pregledi su provedeni na kunićima korištenjem kliničkog magneta od 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) opremljenog ortogonalnim prijemnikom zavojnice uda. Kunići su anestezirani s 20% uretanom (5 mL/kg) putem ušne vene, a zatim su postavljeni na leđa unutar magneta s lumbalnom regijom centriranom na kružnoj površinskoj zavojnici promjera 5 inča (GE Medical Systems). Koronalne T2-ponderirane lokalizacijske slike (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) su snimljene kako bi se definirala lokacija lumbalnog diska od L3-L4 do L5-L6. Sagitalno ravninski T2-ponderirani slojevi su snimljeni sa sljedećim postavkama: brza spin-echo sekvenca s vremenom ponavljanja (TR) od 2200 ms i vremenom eha (TE) od 70 ms, matrica; vidno polje od 260 i osam stimulusa; Debljina rezanja je bila 2 mm, razmak je bio 0,2 mm.
Nakon što je snimljena posljednja fotografija i ubijen posljednji zec, lažni, mišićno ugrađeni i NP diskovi su uklonjeni radi histološkog pregleda. Tkiva su fiksirana u 10% neutralnom puferiranom formalinu tokom jedne sedmice, dekalcificirana etilendiamintetrasirćetnom kiselinom i parafinski secirana. Blokovi tkiva su ugrađeni u parafin i izrezani na sagitalne sekcije (debljine 5 μm) pomoću mikrotoma. Sekcije su obojene hematoksilinom i eozinom (H&E).
Nakon sakupljanja intervertebralnih diskova od zečeva u svakoj grupi, ukupna RNK je ekstrahirana korištenjem UNIQ-10 kolone (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kina) prema uputama proizvođača i ImProm II sistema reverzne transkripcije (Promega Inc., Madison, WI, SAD). Izvršena je reverzna transkripcija.
RT-qPCR je proveden korištenjem Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., SAD) i SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD) prema uputama proizvođača. Volumen PCR reakcije bio je 20 μl i sadržavao je 1,5 μl razrijeđene cDNA i 0,2 μM svakog primera. Primere je dizajnirao OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA), a proizvela ih je Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kina) (Tabela 1). Korišteni su sljedeći uslovi termičkog cikliranja: početni korak aktivacije polimeraze na 94°C tokom 2 minute, zatim 40 ciklusa od po 15 sekundi na 94°C za denaturaciju kalupa, žarenje tokom 1 minute na 60°C, ekstenzija i fluorescencija. Mjerenja su provedena tokom 1 minute na 72°C. Svi uzorci su amplificirani tri puta, a prosječna vrijednost je korištena za RT-qPCR analizu. Podaci amplifikacije analizirani su korištenjem FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SAD). Ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ normalizirana je u odnosu na endogenu kontrolu (ACTB). Relativni nivoi ekspresije ciljne mRNA izračunati su korištenjem 2-ΔΔCT metode.
Ukupni protein je ekstrahovan iz tkiva pomoću homogenizatora tkiva u RIPA puferu za lizu (koji sadrži koktel inhibitora proteaze i fosfataze), a zatim centrifugiran pri 13.000 o/min tokom 20 minuta na 4°C kako bi se uklonili ostaci tkiva. Pedeset mikrograma proteina je naneseno po traci, odvojeno 10% SDS-PAGE, a zatim prebačeno na PVDF membranu. Blokiranje je provedeno u 5% obranom mlijeku u prahu u Tris-puferiranoj fiziološkoj otopini (TBS) koja sadrži 0,1% Tween 20 tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Membrana je inkubirana sa primarnim antitijelom zeca protiv dekorina (razrijeđeno 1:200; Boster, Wuhan, Kina) (razrijeđeno 1:200; Bioss, Peking, Kina) preko noći na 4°C i reagirala je drugog dana; sa sekundarnim antitijelom (kozji anti-zečji imunoglobulin G u razrjeđenju 1:40.000) u kombinaciji sa peroksidazom hrena (Boster, Wuhan, Kina) tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Western blot signali su detektovani povećanom hemiluminiscencijom na hemiluminiscentnoj membrani nakon zračenja X-zracima. Za denzitometrijsku analizu, blotovi su skenirani i kvantifikovani korištenjem BandScan softvera, a rezultati su izraženi kao odnos imunoreaktivnosti ciljnog gena i imunoreaktivnosti tubulina.
Statistički proračuni su izvršeni korištenjem softverskog paketa SPSS16.0 (SPSS, SAD). Podaci prikupljeni tokom studije izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (srednja vrijednost ± SD) i analizirani korištenjem jednosmjerne analize varijanse s ponovljenim mjerenjima (ANOVA) kako bi se utvrdile razlike između dvije grupe. Vrijednost P < 0,05 smatrana je statistički značajnom.
Stoga, uspostavljanje životinjskog modela karcinoma mišićne skupine (MC) implantacijom autolognih NP u tijelo pršljena i provođenjem makroanatomskog posmatranja, MRI analize, histološke evaluacije i molekularno biološke analize može postati važan alat za procjenu i razumijevanje mehanizama ljudskog MC i razvoj novih terapijskih intervencija.
Kako citirati ovaj članak: Han, C. i dr. Životinjski model Modicovih promjena uspostavljen je implantacijom autolognog nucleus pulposusa u subhondralnu kost lumbalne kičme. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. i Boos, N. Magnetna rezonanca lumbalne kičme: prevalencija hernije i retencije diska, kompresije korijena živaca, abnormalnosti završne ploče i osteoartritisa fasetnog zgloba kod asimptomatskih dobrovoljaca. stopa. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS i Leboeuf-Eed, K. Modičeve promjene i njihov odnos prema kliničkim nalazima. European Spine Journal: službena publikacija Evropskog društva za kičmu, Evropskog društva za deformitete kičme i Evropskog društva za istraživanje vratne kičme 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modične promjene na završnim pločama lumbalnih pršljenova: prevalencija i povezanost s bolovima u donjem dijelu leđa i išijasom kod muškaraca radnika srednje dobi. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. i Dalinka, M. Magnetna rezonanca promjena koštane srži u blizini završne ploče kod degenerativne bolesti lumbalne kičme. AJR. Američki časopis za radiologiju 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ i Carter, JR Degenerativna bolest diska: evaluacija promjena vertebralne srži pomoću MRI. Radiologija 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS i Carter, JR Snimanje degenerativne bolesti diska. Radiologija 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktori promjena signala neovertebralne završne ploče (Modic) u opštoj populaciji. European Spine Journal: Službena publikacija Evropskog društva za kičmu, Evropskog društva za deformitet kičme i Evropskog društva za istraživanje vratne kičme, Odjel 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB i Mannisch, K. Modicove promjene nakon hernije lumbalnog diska. European Spine Journal: Službena publikacija Evropskog društva za kičmu, Evropskog društva za deformitete kičme i Evropskog društva za istraživanje vratne kičme 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. i Kaapa, E. Modic promjene tipa I mogu predvidjeti brzo progresivnu deformacijsku degeneraciju diska: jednogodišnja prospektivna studija. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ i Fan, SW Modične promjene: mogući uzroci i doprinos degeneraciji lumbalnih diskova. Medicinske hipoteze 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ruptura internog diska. Problemi s prolapsom diska tokom 50 godina. Kičma (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Vrijeme objave: 13. decembar 2024.